Odpoveď akútnej fázy je nešpecifickou reakciou organizmu na rôzne infekčné ale i neinfekčné (neoplázie, imunitná odpoveď, trauma) stimuly poškodzujúce organizmus. Táto reakcia zahŕňa predovšetkým zmeny v hodnotách proteínov akútnej fázy (APP), ktoré môžeme rozdeliť na negatívne APP- pokles ich hladiny (albumín, transferín) a pozitívne APP- vzostup ich hladiny (CRP, SAA,AGP a iné). Jej hlavnou funkciou je obnoviť homeostázu v organizme a odstrániť príčinu v rannom štádiu ochorenia. Produkcia najvýznamnejších APP prebieha väčšinou v hepatocytoch. Je stimulovaná cytokínmi (predovšetkým interleukíny IL-6, IL- 1 a tumor nekrotický faktor TNF- &) a je druhovo špecifická. Kým u psov alebo ľudí sa za diagnosticky signifikantnú považuje pri zápaloch výrazná zmena hladiny CRP (c-reaktívny proteín), príp. iných APP v krvi, u mačiek sa za tento klinicky významný marker včasnej odpovede na zápalový proces považuje sérový amyloid A (SAA), ktorý je najreaktívnejší.

Obr. 1  Produkcia najvýznamnejších proteínov akútnej fázy zápalu

 

SAA je sérový proteín, s veľkosťou 15kD, ktorý je prekurzorom amyloidného proteínu A. Hlavnou biologickou funkciou SAA je lokalizácia a zhromažďovanie vyprodukovaných zápalových buniek priamo do miesta zápalu, transport cholesterolu do pečene a regulácia metabolizmu lipidov. V praxi sa stanovenie SAA u zvierat donedávna nepoužívalo, nakoľko SAA je hydrofóbny apoliproteín v sére štandardne viazaný s lipoproteínmi vysokej denzity a jeho stanovenie vyžadovalo dôslednú purifikáciu a kvantifikáciu vzorky (Ceron a kol. 2005).

 

Význam a výhody stanovenia SAA

 

Výhodou stanovenia SAA je fakt, že pri správnom skladovaní je stabilný, jeho hodnoty nie sú významne ovplyvnené použitím antikoagulačných látok, alebo pri iných pridružených stavoch ako hemolýza, lipémia, bilirubinémia. Hladina SAA tiež nie je ovplyvnená vekom a pohlavím, ale podobne ako pri CRP platí, že jeho stanovenie sa vzhľadom na nedostatočnú imunitnú odpoveď neodporúča u zvierat mladších ako 3 mesiace. Hladina fSAA (felinný sérový amyloid) stúpa u mačiek v priebehu 8 hodín pri rôznych infekčných ochoreniach bakteriálneho pôvodu. Zvýšené hodnoty fSAA pozorujeme aj u mačiek s ochorením vírusového pôvodu (napr. FIP), pri parazitárnych infekciách, ale tiež po chirurgickej intervencii – výrazný vzostup v priebehu 24 hodín. fSAA stúpa aj pri niektorých endokrinných ochoreniach (diabetes, hyperthyroidizmus), u mačiek s renálnym zlyhaním, a tiež u mačiek s LUTD.
Koncentrácia SAA sa teda ukázala ako významný a nezávislý diagnostický, ale tiež prognostický marker viacerých ochorení (Tamamoto a kol., 2008). SAA ako zápalový marker v krvi stúpa signifikantne rýchlejšie ako leukocyty (WBC) pri akútnych pankreatitídach (Obr. 2).

Obr. 2    Porovnanie nárastu hladiny SAA a leukocytov v krvi mačky pri akútnej pankreatitíde

 

Stanovenie fSAA pomocou analyzátora Fuji Dri Chem Immuno AU1OV:                   

Fuji Dri-Chem fSAA test je novinkou v analyzovateľných parametroch tohto prístroja a je založený na princípe „sendvičovej“ imunoanalýzy. Vzorka sa aplikuje na nosič s fluorescenčne značenou antiSAA protilátkou. Vytvorená fluorescencia je potom priamo úmerná koncentrácii SAA v vzorke – tzv. „fluorometrická imunoanalýza“. Táto metóda analýzy SAA v krvi sa vyznačuje vysokou koreláciou výsledkov v porovnaní s metódou latexovej aglutinácie, ktorá je často v praxi na túto detekciu používaná (Graf. 1).

Graf. 1   Korelácia medzi Fuji Dri-Chem imuno-analýzou a latexovou aglutináciu pri stanovení SAA v krvnom sére mačky

 

Meranie pomocou analyzátora je automatické (samokalibrácia, samoriedenie) a veľmi jednoduché. Stačí vložiť skúmavku so vzorkou (1,5ml/0,5ml) a pipetovú špičku na naberanie a vstrekovanie vzorky do špecifickej analytickej kazetky, ktorá obsahuje všetky potrebné reagencie. Výsledok je k dispozícii do 10 minút.

Keďže stanovenie SAA v krvi je charakteristické nutnosťou riedenia, prístroj FDR Immuno AU10 túto analýzu vykonáva v móde D, ktorý automaticky výsledok interpretuje s ohľadom na adekvátne riediace podmienky (Obr. 3).

Obr. 3   Pri stanovení fSAA na prístroji FDR Immuno AU10 musí svietiť značka „D“ (na displeji v pravom hornom rohu)

 

 

Výhody stanovenia fSAA na analyzátore Fuji Dri-Chem Immuno AU10:

  • Vysoko presná metóda imunofluorescencie

  • Nízky minimálny objem analyzovanej vzorky: 10 µl

  • Oba typy analyzovateľnej vzorky: krvná plazma aj krvné sérum

  • Široké dynamické rozmedzie: až 3,75 – 225.0 µg/mL

  • Rýchlosť vyšetrenie: výsledok do 10 minút

  • Analýza bez nutnej kalibrácie (samokalibračná)

  • Bez nutnosti manuálneho riedenia vzorky (samoriedenie – D)

 

V praxi poskytuje stanovenie fSAA najmä možnosť prvotnej identifikácie zápalového procesu, zhodnotenie závažnosti zápalového procesu, monitoring úspešnosti liečby, odhalenie komplikácií chronických stavov pri pridružení sekundárnych infekcií, komplikácie post-operačných stavov a zhodnotenie potreby nasadenia ATB terapie po takýchto zákrokoch.

Referenčná hodnota fSAA je na základe klinických testovaní u mačiek ≤0.82 mg/l. Každý výrobca však štandardne stanovuje „vlastné“ referenčné rozmedzie pre daný analyzátor. Fuji Dri-Chem Immuno AU10 má stanovené toto rozmedzie na úroveň ≤ 5.49 µg/ml.

 

Použitá literatúra:

Tamamoto T., Ohno K., Ohmi A., Goto-Koshino Y., Tsujimoto H.: Verification of measurement of the feline serum amyloid A (SAA) concentration by human SAA turbidimetric immunoassay and its clinical application, 2008, J Vet Med Sci, 70(11): 1247 – 52. doi: 10.1292/jvms.70.1247.

 

Ceron J. J. , Eckersall P. D., Martynez-Subiela S.: Acute phase proteins in dogs and cats: current knoledge future perspectives. 2005, Vet Clin Patho, 34(2): 85 – 99, doi: 10.1111/j.1939-165x.2005.tb00019.x.